குவானிடைன் தியோசயனேட் கரைசல் தயாரிப்பதில் பொதுவான கேள்விகள் மற்றும் பதில்கள்

குவானிடைன் தியோசயனேட் ஒரு வலிமையான புரதச்சத்து நீக்கம். இது புரதங்களை விரைவாகக் கரைப்பது மட்டுமல்லாமல், உயிரணு கட்டமைப்பின் துண்டு துண்டாக வழிவகுக்கும், மேலும் இரண்டாம் நிலை கட்டமைப்பின் அழிவின் காரணமாக நியூக்ளிக் அமிலங்களிலிருந்து அணு புரதங்களை விரைவாகப் பிரிக்கலாம், ஆனால் RNases மீது வலுவான denaturation விளைவையும் கொண்டுள்ளது. எனவே, குவானிடைன் தியோசயனேட் செல்களை லைஸ் செய்யவும், ஆர்.என்.ஏவை புரதத்திலிருந்து பிரிக்கவும், ஆர்.என்.ஏ.வை கரைசலில் வெளியிடவும் டினாட்யூரண்டாகப் பயன்படுத்தப்படலாம். இருப்பினும், குவானிடைன் தியோசயனேட் கரைசலை தயாரிப்பதிலும் பயன்படுத்துவதிலும் சில சிக்கல்கள் அடிக்கடி சந்திக்கப்படுகின்றன. இந்தக் கட்டுரை இந்த சிக்கல்களுக்கு ஒவ்வொன்றாக பதிலளிக்கும்.

குவானிடைன் தியோசயனேட் கரைசலை இப்போது பயன்படுத்தி தயார் செய்ய வேண்டுமா?

குவானிடைன் தியோசயனேட்டின் இறுதி செறிவு உதாரணமாக 4m ஆகும்: 42mm சோடியம் சிட்ரேட், 0.83% n-லாரில் சர்கோசின் (சோடியம் டோடெசில், n-மெத்தில்கிளைசின்), 0.2mm β- சிஎஸ்பி இடையகத்திலிருந்து CSB பஃபர் தயாரித்தல்; 25 கிராம் குவானிடின் தியோசயனேட் மற்றும் 33 மில்லி சிஎஸ்பி தாங்கல் கரைசல் முற்றிலும் கரையும் வரை கலக்கப்படுகிறது. குறைக்கப்பட்ட கரைசலை 65 இல் சூடாக்கி கரைத்து தயாரிக்கலாம்℃ மற்றும் 4 இல் சேமிக்கப்படுகிறது℃ காத்திருப்புக்காக.

எனவே, குவானிடின் தியோசயனேட் கரைசல் இப்போது பயன்படுத்தப்பட்டு தயாரிக்கப்பட வேண்டியதில்லை, தற்போது சந்தையில் பல்வேறு செறிவுகளின் தீர்வுகள் உள்ளன, ஆனால் சேமிப்பு நேரம் மிக நீளமாக இருப்பது எளிதல்ல, இல்லையெனில் மழைப்பொழிவு இருக்கும் பயன்படுத்துவதற்கு முன் கவனமாக சரிபார்க்கப்பட்டது; கூடுதலாக, ஒரு முறை தயாரித்தல் அதிகமாக இருந்தால், மீண்டும் பேக் செய்ய பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.

குவானிடின் தியோசயனேட் கரைசலுக்கு தயாரான பிறகு கருத்தடை செய்ய வேண்டுமா?

குவானிடின் தியோசயனேட் கரைசலை கிருமி நீக்கம் செய்வது அவசியமில்லை, இது மிகவும் நிலையானது அல்ல, மேலும் 0.1% DEPC நீர் பொதுவாக பைரோலிசிஸ் கரைசலுடன் பயன்படுத்தப்படுகிறது, மேலும் தண்ணீர் கருத்தடை செய்யப்படுகிறது. கூடுதலாக, ஆர்என்ஏவைப் பிரித்தெடுப்பதற்கான அனைத்து உலைகளும் டிஇபிசி தண்ணீரில் தயாரிக்கப்பட வேண்டும், மேலும் அந்த காரணி புதிதாக திறக்கப்பட்டு பிரத்தியேகமாக ஆர்என்ஏவிற்காக பயன்படுத்தப்பட வேண்டும்.

தயாரிக்கப்பட்ட லைசேட்டை கிருமி நீக்கம் செய்ய வேண்டிய அவசியமில்லை என்றாலும், பரிசோதனையில் பயன்படுத்தப்பட்ட பிளாஸ்டிக் பொருட்கள் RNase இலவசம் என்று குறிக்கப்பட்டுள்ளது என்பதை கவனத்தில் கொள்ள வேண்டும். அவை பயன்பாட்டிற்கு திறக்கப்படவில்லை என்றால், அவற்றை நேரடியாகப் பயன்படுத்தலாம். மற்றவை சிகிச்சை செய்யப்பட வேண்டும்: DEPC ஐ அதன் இறுதி செறிவு 0.1% ஆக்க இரட்டை காய்ச்சி வடிகட்டிய நீரில் சேர்க்கவும், பிளாஸ்டிக் பொருட்களை அதில் ஊறவைக்கவும், சமையலறையை ஒரே இரவில் காற்றோட்டம் செய்யவும், பின்னர் அலுமினிய தகடு, அதிக வெப்பநிலை மற்றும் உயர் அழுத்த கருத்தடை மூலம் குறைந்தபட்சம் 30 நிமிடங்களுக்கு மூடவும். உலர் மற்றும் காத்திருப்பு.